Bradford Protein Assay Kit 

                                      Bradford蛋白濃度測定試劑盒

產(chǎn)品簡介： 

本公司生產(chǎn)的Bradford蛋白濃度測定試劑盒是根據(jù)目前廣泛應(yīng)用的蛋白濃度檢測方法之一Bradford法研制而成。其操作簡單，靈敏度高，檢測速度極快。可檢測濃度下限達(dá)25ug/ml的蛋白樣品，最小檢測蛋白量達(dá)到0.5ug，待測樣品體積為1-20ul。

本產(chǎn)品主要成分為考馬斯亮藍(lán)G250。

產(chǎn)品組分：

使用方法:

1、 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配置液加入到25mgBSA的蛋白標(biāo)準(zhǔn)管中，完全溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，即為25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制成的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液可-20℃長期保存。

2、 取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋至終濃度為0.5mg/ml。標(biāo)準(zhǔn)品*好與蛋白樣品用同樣的溶液稀釋。但為了簡便起見，通常使用0.9%NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

3、 做標(biāo)準(zhǔn)曲線。將標(biāo)準(zhǔn)品按0，1，2，4，8，12，16，20ul加到96孔板中，不足20ul的加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20ul。

4、 將待測的蛋白樣品稀釋至合適濃度，加到96孔板中，使待測樣品總體積也為20ul。

5、 每孔加入考馬斯亮藍(lán)G250溶液200ul，充分混勻（可將酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30s），室溫放置3-5min后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號做參比，在 595nm波長下比色測定，記錄各孔吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)品蛋白含量（ug）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6、 如用分光光度計測定，請在第三步的時候?qū)?biāo)準(zhǔn)品體積改為1ml，濃度梯度用生理鹽水稀釋為0，1，2，5，10，15，30ug/ml。或根據(jù)樣品調(diào)整濃度梯度。

7、將樣品稀釋至合適濃度，加到小試管中，使待測樣品總體積也為1ml。

8、 每只試管加考馬斯亮藍(lán)G250溶液3ml，充分混勻，室溫放置3-5min后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號做參比，在 595nm波長下比色測定，記錄各孔吸光度值。

注意事項：

1、 考馬斯亮藍(lán)G250溶液使用前請顛倒3-5次，混勻。

2、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)請在全部溶解后先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)。

3、 將考馬斯亮藍(lán)G250溶液回復(fù)到室溫再使用，有利于提高檢測的靈敏。

4、 Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20,60,80低于0.015%。含去垢劑的樣品推薦使用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒（BL521A）。染色時間不能太長，否則活細(xì)胞會因染料積累而染成顏色，使檢測結(jié)果偏低。

5、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：

考馬斯亮藍(lán)G250溶液室溫保存，配置好的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液-20℃凍存。效期一年。