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更新日期2017-03-06 19:14
品牌: |
未填 |
所在地: |
上海 |
起訂: |
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供貨總量: |
未填 |
有效期至: |
長期有效 |
人B細胞淋巴瘤-XL(Bcl-XL)試劑盒(ELISA)
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人B細胞淋巴瘤-XL(Bcl-XL)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人B細胞淋巴瘤-XL(Bcl-XL)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人B細胞淋巴瘤-XL(Bcl-XL)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本處理
1. 本公司只對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預留充足的樣本。
2. 實驗前應預測標本含量,如果標本濃度過高,應對標本進行稀釋,使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。
4. 使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。
5. 若樣本為細胞培養上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態、細胞數量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。
7. 建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結果偏差。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
了解更多:豬ELISA試劑盒 http://www.hybiosh.com/Products/T61249.html
問題解答
若實驗效果不好,請及時對顯色結果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯系我公司技術支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:
問題 |
可能原因 |
解決方案 |
標準曲線差 |
吸取及洗滌不充分 |
充分的吸取及洗滌 |
移液不精確 |
檢查和校正移液器 |
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精密度低 |
洗滌不充分 |
按說明書要求充分洗滌和浸泡 |
混勻不充分和吸取試劑不足 |
充分混勻和吸取試劑 |
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重復利用吸頭、容器和覆膜 |
使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜 |
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加樣不精確 |
檢查和校正移液器 |
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O.D值低 |
每孔加的試劑量不精確 |
校正移液器,精確加入試劑 |
溫育時間不正確 |
保證充足的溫育時間 |
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溫育溫度不正確 |
試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度 |
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酶標記物或底物失效 |
通過混合酶標記物和底物,顏色應迅速顯現來檢查 |
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沒有加入終止液 |
按照說明書實驗操作步驟加入終止液 |
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超出讀數時間讀數 |
在說明書推薦的讀數時間內讀數 |
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樣本值 |
不正確的樣本儲存方式 |
正確儲存樣本,使用新鮮樣本進行實驗 |
不正確的樣本收集和處理方法 |
采取正確的樣本收集和處理方法 |
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待測物質在樣本中含量低 |
使用新鮮樣本,重復實驗 |
BIM試劑盒:http://www.systemsbim.com/
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